La pintura se encuentra en la segunda calle del segundo cuerpo del Retablo de Santa Rosa de Lima (Cédula No. 37). El dominico Leonardo Hansen, contemporáneo y primer biógrafo de santa Rosa, respecto al Matrimonio Místico dice: "Llegó el día Domingo de Ramos" y el Niño Jesús que se encontraba sobre las piernas de su Madre en la Capilla del Rosario, le dijo: "Rosa de mi corazón, yo te quiero por esposa". Estas voces penetraron el corazón de la virgen... no sabía que decir, ...ni se le ocurrieron palabras más adecuadas que las que pronunció la humildísima Madre del Redentor al ser escogida para tal dignidad: "Ecce ancilla Domini, dijo Aquí tenéis. Señor, vuestra sierva, aquí tenéis una esclava dispuesta a serviros. Oh Rey de Majestad eterna! tuya soy, confieso que soy tuya y seré tuya eternamente." La Virgen María, madrina del Matrimonio, le dijo a Rosa: "Mira, atiende, oh Rosa, la merced crecida que mi Hijo ha sido servido de hacerte". En esta pintura la Virgen María -sentada sobre unas nubes- carga sobre sus piernas al Niño Jesús quien le agarra a la santa el dedo índice de la mano derecha. María viste túnica capa y corona; el Niño una túnica y también está coronado. Santa Rosa ocupa el lado derecho de la composición; se encuentra arrodillada vistiendo el hábito de profesa -con manto negro- y con un rosario en el pecho. Su actitud es de humildad y sometimiento.
